TRFS-green是一种高选择性的荧光探针,用于成像活细胞中的硒蛋白硫氧还蛋白还原酶(TrxR)。TRFS-green的最大吸光度在373nm左右。经TrxR活化后,最大吸光度约为440nm。TRFS-green是TrxR的第一个具有绿色发射光的荧光探针。然而,TRFS-green对酶的响应速度较慢,即使使用三(2-羧乙基)膦(TCEP)作为还原剂,也需要2小时以上才能达到最大荧光信号。
TRFS-green显示出由TrxR介导的二硫键裂解和随后的分子内环化诱导的绿色荧光开关变化,以释放掩蔽的萘酰亚胺荧光团。当在377nm处激发时,TRFS-green在~480nm处会有微弱信号。用TrxR抑制剂以剂量依赖性方式预处理活细胞,可抑制活细胞中TRFS-green的荧光信号,从而促进基于活细胞的TrxR抑制剂筛选试验的发展。
TRFS-green对GSH或Cys(细胞中的主要硫醇)或内源性还原剂(例如维生素C和NADPH)没有反应。测量粗细胞提取物中的TrxR活性:将细胞裂解物与TRFS-green孵育适当的时间(通常1-2小时),并通过荧光计测定荧光强度(Em=540nm,Ex=440nm)。还可以在给定的时间段内监测荧光的时间依赖性增加(Em=540nm,Ex=440nm)。
TRFS-green(10μM;2-4h)处理细胞后,可通过显微镜的绿色荧光通道观察。注意:为了获得清晰的荧光图像,建议在拍照前立即用PBS或新鲜培养基清洗细胞以去除残留的TRFS-green。
TRFS-green的分子式为C20H20N2O4S2 ,分子量为416.51,CAS号为1513848-14-0,纯度≥ 95%,类白色或淡黄色固体。
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